Súpravy pomocných činidiel ELISA

Súpravy pomocných činidiel (Ancillary Reagent Kits) pre ELISA testy sú esenciálnymi komponentmi pre výskumníkov, ktorí si vyvíjajú vlastné ("home-brew") imunoanalýzy, alebo pre laboratóriá, ktoré potrebujú doplniť či optimalizovať špecifickú časť protokolu z komerčného ELISA kitu. Zatiaľ čo kompletné kity ponúkajú pohodlie, pomocné činidlá poskytujú flexibilitu a nákladovú efektivitu pri práci vo väčšom meradle.

Prečo sú pomocné činidlá kľúčové?

Základom každého sendvičového testu ELISA sú páry protilátok – záchytná a detekčná. Avšak na to, aby sa reakcia úspešne uskutočnila a signál bol správne vygenerovaný a odčítaný, je potrebný celý rad ďalších roztokov. Tieto činidlá zabezpečujú nízke pozadie, vysokú citlivosť a stabilitu testu.

Prehľad kľúčových pomocných činidiel

Náš sortiment (napr. od Elabscience®) pokrýva všetky kroky potrebné na zostavenie úspešného imunoanalytického testu:

1. Pufre na povrchovú úpravu (Coating Buffers)

Základný pufer (zvyčajne na báze karbonátu alebo PBS) s optimálnym pH, ktorý zabezpečuje pasívnu a stabilnú väzbu záchytnej protilátky na povrch ELISA platničky.

2. Blokačné pufre (Blocking Buffers)

Jeden z najdôležitejších krokov. Po naviazaní záchytnej protilátky zostávajú na povrchu platničky voľné miesta, ktoré by mohli nešpecificky viazať iné protilátky alebo proteíny zo vzorky, čo vedie k vysokému pozadiu. Blokačný pufer (často na báze BSA alebo mliečneho proteínu) tieto miesta "zablokuje" a pasivuje povrch.

3. Premývacie pufre (Wash Buffers)

Roztoky (typicky PBS-T alebo TBS-T s obsahom detergentu ako Tween-20) používané na opakované premývanie platničky medzi jednotlivými krokmi. Ich úlohou je odstrániť všetky nešpecificky naviazané a prebytočné komponenty, čím sa opäť znižuje pozadie a zvyšuje pomer signálu k šumu.

4. Riedidlá pre protilátky a vzorky (Diluents)

Špeciálne pufre optimalizované na riedenie vzoriek, detekčných protilátok a enzýmových konjugátov. Zabezpečujú správne pH, iónovú silu a znižujú nešpecifické interakcie počas inkubácie.

5. Enzýmové substráty a Stop roztoky

Samotné detekčné činidlá:

• Substráty: Najčastejšie TMB (pre HRP konjugáty), ktorý vytvára modrý farebný produkt, alebo pNPP (pre AP konjugáty).
• Stop roztoky: Zvyčajne slabá kyselina (napr. H₂SO₄), ktorá okamžite zastaví enzymatickú reakciu (pri TMB zmení farbu z modrej na žltú) a stabilizuje signál pred odčítaním v čítačke platničiek.

Spoločnosť Elabscience® poskytuje tieto činidlá ako jednotlivé komponenty alebo ako kompletné súpravy pomocných činidiel, ktoré vám pomôžu úspešne a spoľahlivo vykonať vaše experimenty ELISA.