ELISPOT kity
Súprava ELISPOT od Elabscience je založená na princípe sendvičovej metódy ELISA v kombinácii s technológiou bunkových kultúr. Na zachytenie cytokínov vylučovaných bunkami sa používajú vopred nanesené záchytné protilátky a sekundárna protilátka označená enzýmom vytvára farebné škvrny, čo umožňuje funkčnú detekciu na úrovni jednej bunky. ELISPOT ponúka ultravysokú citlivosť (dokáže detegovať aktívne bunky tak zriedkavo ako jedna z milióna), rozlíšenie jednej bunky, vizualizáciu a je jednoduchý a efektívny na obsluhu.
Súprava ELISPOT je ideálnym nástrojom na štúdium funkcie bunkovej imunity, na presné hodnotenie aktivity T/B buniek. Široko sa využíva pri vývoji vakcín, imunoterapii nádorov, výskume mechanizmov autoimunitných ochorení a pri diagnostike a monitorovaní účinnosti infekčných ochorení.
Radenie produktov
10 položiek celkom
Výpis produktov
Ovládacie prvky výpisu
10 položiek celkom
ELISPOT (Enzyme-Linked ImmunoSpot Assay) kity sú vysoko citlivé imunoanalytické súpravy určené na detekciu a kvantifikáciu sekrécie proteínov, ako sú cytokíny alebo protilátky, na úrovni jednotlivých buniek. Na rozdiel od tradičných ELISA kitov, ktoré merajú celkovú koncentráciu proteínu v roztoku (napr. v sére alebo supernatante), ELISPOT odpovedá na otázku: "Koľko buniek v mojej populácii produkuje túto špecifickú molekulu?"
Princíp metódy ELISPOT
Metóda ELISPOT je v podstate modifikáciou sendvičovej ELISA, ktorá je prispôsobená na vizualizáciu sekrécie z jednotlivých buniek. Proces prebieha v špeciálnych mikrotitračných platničkách, ktorých dno je tvorené PVDF membránou s vysokou väzbovou kapacitou pre proteíny.
- Zachytávanie (Capture): Dno platničky je potiahnuté špecifickou záchytnou protilátkou (napr. anti-IFN-gamma).
- Kultivácia buniek: Na pripravený povrch sa nanesie suspenzia buniek (napr. T-lymfocyty) a platnička sa inkubuje.
- Sekrécia: Aktivované bunky začnú produkovať a vylučovať cieľový proteín (napr. IFN-gamma).
- Lokálna väzba: Vylúčený proteín je okamžite zachytený protilátkami na membráne priamo pod bunkou, ktorá ho vyprodukovala.
- Premytie: Bunky sa dôkladne odmyjú. Na membráne zostanú len "odtlačky" (spoty) miesta, kde bol proteín vylúčený.
- Detekcia: Pridá sa druhá, biotínom značená detekčná protilátka, po ktorej nasleduje konjugát (napr. streptavidín-HRP).
- Vznik "Spotu": Pridaním precipitujúceho substrátu (napr. AEC alebo BCIP/NBT) vznikne v mieste reakcie nerozpustná farebná zrazenina – viditeľná škvrna (Spot).
Aplikácie a výhody
Každá výsledná škvrna (spot) predstavuje jednu bunku, ktorá aktívne vylučovala cieľový proteín. Výsledky sa preto neuvádzajú v pg/ml, ale ako počet spot-forming units (SFU) na milión buniek.
Kľúčové výhody:
- Extrémna citlivosť: Metóda dokáže detegovať extrémne zriedkavé bunkové populácie (až 1 z 1 000 000 buniek).
- Funkčná analýza: Meria skutočnú sekréciu proteínu, nie len jeho prítomnosť alebo génovú expresiu. Poskytuje funkčný údaj o aktivite bunky.
Hlavné aplikácie:
- Imunologický výskum: Monitorovanie T-bunkovej a B-bunkovej odpovede.
- Vývoj vakcín: Meranie imunitnej odpovede (napr. produkcie IFN-gamma T-bunkami) po vakcinácii.
- Onkológia: Monitorovanie bunkovej imunity proti nádorom.
- Výskum alergií a autoimunitných ochorení.
Naše ELISPOT kity (napr. od Elabscience®) poskytujú všetky kľúčové komponenty (platničky potiahnuté protilátkami, detekčné protilátky, konjugáty a substráty) pre spoľahlivú a citlivú analýzu v rámci vášho
